Содержание
Для решения проблем, связанных влиянием гематокрита на параметры «сухих пятен крови», компания CAMAG разработала полностью автоматизированный модуль определения гематокрита, который позволяет быстро и просто измерять его величину и вводить поправки в DBS анализ. Принцип работы, основанный на спектроскопии в режиме отражения, был тщательно аттестован.
Встроенный в автосамплер CAMAG DBS-MS 500, сканнер позволяет проводить анализ «сухих пятен крови» на определенной длине волны для получения данных, которые коррелируют с величиной гематокрита.
Новый сканнер устраняет необходимость объемного отбора проб для количественного DBS анализа: когда используется фиксированная область экстракции внутри пятна крови с элюированием из центра каждого пятна и коррекцией содержания целевого аналита относительно величины гематокрита.
Коррекция на величину гематокрита компенсирует изменение объема крови в пределах фиксированной площади пятна, так как распределение крови на фильтровальной бумаге зависит от гематокрита. Следовательно, знание точного объема крови при нанесении не является более необходимым.
![Пример изменения гематокрита при дегидратации и его влияние на DBS анализ](/uploads/storage/publikacii/59/avtomaticheskaya-popravka-na-gematokrit-dlya-dbs-analiza-1.jpg)
Область применения
Сканер гематокрита позволяет компенсировать любое известное влияние гематокрита, такие как изменение площади пятна, изменение степени извлечения или свойств аналита, связанных с гематокритом. Кроме того, можно нормализовать аналитический результат к полученной величине гематокрита. Система идеально подходит для надежного количественного анализа DBS проб с неизвестным объемом крови (т.е. при нанесении без измерений объема).
Рекомендуемое оборудование
- Автосамплер CAMAG DBS-MS 500 со встроенным сканнером гематокрита.
- ВЭЖХ-МС/МС система для работы с DBS автосамплером (например, Shimadzu 8050 или аналог).
- Центрифуга или анализатор крови для приготовления калибраторов гематокрита
Дополнительно:
- Робот CTC PAL для отбора проб в виалы.
Пробы
Подлинные образцы могут быть скомпонованы с выбранной калибровочной серией. Таким образом, пользователь может свободно построить свою собственную калибровочную кривую для своих DBS карточек (фильтровальной бумаги), типа антикоагулянта и калибровочного диапазона. Было подтверждено, что измерение гематокрита, основанное на коэффициенте отражения, не зависит от условий хранения, срока хранения и температуры.
Подготовка калибраторов гематокрита
Образцы калибраторов для гематокрита могут быть получены с использованием двух различных способов:
Способ 1
Свежесобранную кровь центрифугируют при температуре окружающей среды в течение 10 мин при 1600 RCF для разделения эритроцитов (RBC) и плазмы. Эти две фракции собирают в отдельные пробирки и затем смешивают в разных пропорциях в пробирки Eppendorf с помощью автодозатора для получения калибраторов с различными величинами гематокрита (например, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, и 0,7). Затем из каждой пробирки калибраторы наносят карточки Ahlstrom TFN и высушивают в течение не менее 3 ч при комнатной температуре.
Способ 2
В способе 2 используется либо добавление, либо удаление плазмы. Свежесобранную кровь с известной величиной гематокрита сначала центрифугируют в отдельных пробирках при 1300 RCF в течение 10 минут, чтобы в конечном итоге получить разный гематокрит (например, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, и 0,7). После центрифугирования плазма либо удаляется, либо добавляется в каждую пробирку для достижения желаемой величины гематокрита и проба снова тщательно перемешивается. Затем из каждой пробирки калибраторы наносят карточки Ahlstrom TFN и высушивают в течение не менее 3 ч при комнатной температуре.
Для точного сравнения величин гематокрита подготовленные калибровочные образцы жидкой крови каждого калибратора должны быть проанализированы либо с помощью гематологического анализатора (например, KX-21N фирмы Sysmex, Кобе, Япония), либо с помощью центрифуги (например, hematokrit 200 фирмы Hettich, Тутлинген, Германия) в тот же день.
Процесс анализа гематокрита
Для каждой пробы измеряется коэффициент отражения чистой фильтровальной бумаги и коэффициент отражения в центре пятна. Для создания калибровки определяется зависимость измеренной интенсивности сигнала на DBS карточке от известных значений гематокрита. Калибровочная кривая аппроксимируется с помощью линейного регрессионного анализа. С использованием полученного уравнения можно определить гематокрит аутентичных образцов на DBS карточках.
![Сравнение величин гематокрита полученных оптическим методом и центрифугированием жидкой крови](/uploads/storage/publikacii/59/avtomaticheskaya-popravka-na-gematokrit-dlya-dbs-analiza-2.jpg)
Результаты
Если зависимость гематокрита с анализируемым веществом известна, то может быть применен алгоритм нормализации. Подобно нормализации образцов мочи на содержание креатинина, нормализация гематокрит-зависимых аналитов позволяет вводить поправку на гематокрит по выбору. Концентрации у испытуемых мужского и женского пола, которые имеют разные диапазоны гематокрита, могут быть сравнены при одной и той же величине гематокрита. Это может быть в целом интересно для любой оценки, где пороговые концентрации использовались без учета величины гематокрита пробы.
![Пример коррекции величины содержания Фосфатидилэтанола 16:0/18:1.](/uploads/storage/publikacii/59/avtomaticheskaya-popravka-na-gematokrit-dlya-dbs-analiza-3.jpg)
Добавить комментарий