Рекомендации для первого использования новой ВЭЖХ колонки

Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) – аналитический метод для разделения, идентификации и количественного определения компонентов в смесях. Метод основан на взаимодействии компонентов образца с неподвижной фазой: образец проходит через колонку, заполненную сорбентом. Колонки для ВЭЖХ являются ключевым компонентом системы и всего аналитического метода. От корректной работы колонки зависит весь процесс разделения и результаты исследования. В этой статье мы обсудим, как правильно использовать новую колонку для ВЭЖХ при первом применении.

Содержание:

1.    Подготовка колонки для ВЭЖХ

2.    Активация колонки для ВЭЖХ

3.    Подготовка образца

4.    Выбор подвижной фазы

5.    Уравновешивание колонки для ВЭЖХ

6.    Ввод образца и разделение

7.    Обработка данных

Подготовка колонки для ВЭЖХ

ВЭЖХ колонка представляет собой стальную трубку, заполненную мелкодисперсным сорбентом (неподвижной фазой) для разделения и анализа сложных смесей химических веществ с помощью подвижной фазы под высоким давлением. Колонка позволяет быстро и точно определять компоненты образца.

Перед использованием новой колонки для ВЭЖХ важно правильно подготовить ее. Процесс подготовки включает промывку колонки подвижной фазой для удаления любых возможных загрязнений или остатков упаковочного материала. Также важно проверить колонку на наличие утечек. Для этого можно провести испытание под давлением и убедиться в отсутствии капель.

Активация колонки для ВЭЖХ

Следующим шагом является активация новой колонки для обеспечения ее оптимальной работы. Процедура активации заключается в подаче через колонку серии тестовых проб для установления ее базовых рабочих параметров. Данный этап может быть выполнен как с использованием стандартной тестовой смеси, так и с серией соединений, охватывающих диапазон молекулярных масс и полярностей, предполагаемых к исследованию в последующих анализах. Кондиционирование также способствует удалению потенциальных остаточных загрязнений, которые могут быть внесены на этапе подготовки.

Подготовка образца

Подготовка образца также является важным этапом, оказывающим существенное влияние на качество и предсказуемость результатов. Раствор образца необходимо отфильтровать с целью удаления твердых частиц, которые могут засорить колонку. Важно обеспечить надлежащее растворение образца в подвижной фазе для оптимального взаимодействия подвижной и неподвижной фаз.

Выбор подвижной фазы

Подвижная фаза – растворитель, который переносит образец через хроматографическую колонку. Выбор подвижной фазы важен для получения качественных результатов и зависит от природы образца и используемой неподвижной фазы. Подвижная фаза может представлять собой растворитель или смесь растворителей. Подвижную фазу следует выбирать с учетом особенностей ее взаимодействия с образцом и неподвижной фазой, а также ее способности эффективно элюировать компоненты образца.

Уравновешивание колонки для ВЭЖХ

Перед анализом образца хроматографическую колонку необходимо привести в равновесное состояние подвижной фазой. Колонку уравновешивают до полного насыщения неподвижной фазы подвижной фазой, пропуская через нее подвижную фазу в течение заданного времени. Этот этап крайне важен для обеспечения воспроизводимости и стабильности результатов.

Ввод образца и разделение

После уравновешивания колонки можно выполнять ввод пробы (инжектирование). При прохождении через колонку компоненты пробы взаимодействуют с неподвижной фазой, что приводит к их разделению. Разделение основано на различии сродства компонентов к неподвижной и подвижной фазам, а также их относительной полярности и молекулярной массы.

Обработка данных

После завершения разделения проводят анализ полученных пиков для идентификации индивидуальных компонентов в пробе. Пики анализируют с использованием ряда методов, включая УФ-детектирование, масс-спектрометрию или другие спектроскопические методики. Полученные данные используют для количественного определения компонентов пробы и сравнения проб по качественным и количественным показателям.

Использование новой колонки для ВЭЖХ требует тщательной подготовки, кондиционирования, выбора подвижной фазы и уравновешивания. Последовательное и корректное выполнение всех необходимых действий обеспечит оптимальное функционирование системы ВЭЖХ и долгий срок службы оборудования, позволит получать качественные данные для любых исследовательских задач.

Глювекс предлагает своим клиентам широкий выбор колонок для хроматографии: колонки для ГХ, колонки для ВЭЖХ, предколонки в каталоге в соответствующем разделе на сайте.

Для заказа доступен широкий ассортимент расходных материалов для самых разных задач от рутинных анализов до сложных исследований. Для заказа изделий оставьте заявку по адресу sales@gluvex.com или свяжитесь с нами по телефону 8 (495) 291-39-19.

Подписывайтесь на наш Telegram-канал, чтобы быть в курсе новостей сервисного центра Глювекс и новых поступлений на склад, полезных и интересных публикаций на тему лабораторного оборудования и расходных материалов.