Оставьте заявку
Расскажите в подробностях, что вас интересует — наши квалифицированные специалисты свяжутся с вами и прокосультируют вас
Пирогены: что это, как их определяют и как от них избавляются
Пирогенами называют вещества, которые при попадании в кровь вызывают лихорадку. Главные из них составляют бактериальные эндотоксины (фрагменты клеточной стенки грамотрицательных бактерий), поэтому все парентеральные препараты проверяют на пирогенность или на эндотоксины.
Обычная стерилизация пирогены не убирает. Эндотоксин не живая клетка, а липополисахарид, поэтому он выдерживает автоклавирование и надёжно не задерживается стерилизующим фильтром 0,22 мкм. По этой причине посуду для инъекционных растворов и для самого анализа на эндотоксины депирогенизируют сухим жаром, обычно при 250 °C.
Шкафы для депирогенизации посуды
Memmert UF с принудительной конвекцией, до +300 °C
Где контролируют пирогены
Требование апирогенности есть в спецификациях на растворы для инъекций и инфузий, воду для инъекций, лекарственные формы для внутриглазного введения и медицинские изделия, контактирующие с кровью. На производстве эндотоксины контролируют на всём пути: исходная вода, субстанции, первичная упаковка, готовый препарат. Для самой воды для инъекций фармакопеи ставят предел менее 0,25 ЕЭ/мл.
Норму для препарата считают от дозы по формуле предел = K / M. Здесь M обозначает максимальную дозу на килограмм массы в час, а K соответствует пороговой пирогенной дозе (5 ЕЭ/кг для большинства путей парентерального введения). Следовательно, чем больше доза препарата, тем строже предел эндотоксинов в нём.
Как определяют пирогены
- ЛАЛ-тест (испытание на бактериальные эндотоксины). Лизат амебоцитов мечехвоста реагирует с эндотоксином, и по этой реакции судят о его количестве. ГФ описывает три подхода: гель-тромб, турбидиметрический и хромогенный. Результат выражают в единицах эндотоксина (ЕЭ) относительно международного стандарта, и именно ЛАЛ-тест служит основным методом контроля серий.
- Тест на пирогенность на кроликах. Раствор вводят в ушную вену трём кроликам и несколько часов измеряют температуру тела. Метод выявляет и неэндотоксиновые пирогены, однако от него отказываются. В Европейской фармакопее тест убрали из частных статей с 1 июля 2025 года, а с 1 января 2026 года исключили и саму общую главу 2.6.8.
- Тест активации моноцитов. Клетки крови человека выделяют цитокины в ответ на эндотоксины и многие неэндотоксиновые пирогены, поэтому тест, как и испытание на кроликах, выявляет не только эндотоксины. Пригодность теста для конкретного препарата подтверждают отдельно, проверяя мешающие факторы. Он описан в ГФ РФ и Фармакопее ЕАЭС.
Сам ЛАЛ-тест чувствителен к посторонним эндотоксинам, поэтому вода для него по ГФ должна отвечать требованиям к воде для инъекций и не содержать эндотоксинов. По той же причине посуду и наконечники берут апирогенные, иначе эндотоксин с их поверхности попадёт в пробу и завысит результат.
Как обеспечивают апирогенность
Стеклянную посуду депирогенизируют сухим жаром. ГФ рекомендует нагревать её при 250 °C не менее 30 минут по валидированной процедуре, а при валидации по USP показывают снижение эндотоксина не менее чем в 1000 раз. Поэтому шкаф должен держать температуру выше 250 °C с запасом, а принудительная конвекция выравнивает её по камере, чтобы в загрузке не оставалось холодных зон.
Воду для инъекций на производстве получают на промышленных установках, чаще всего дистилляцией. В лаборатории для приготовления растворов и промывки посуды используют сверхчистую воду, а бактерии из неё задерживает финишный фильтр на выходе системы.
Обычный мембранный фильтр 0,2 мкм задерживает эндотоксины лишь частично, в зависимости от их агрегации, поэтому для апирогенной воды ставят ультрафильтр или фильтр с заряженной мембраной, у которого изготовитель подтвердил удаление эндотоксинов.
Системы очистки воды RephiLe
Сверхчистая вода типа I, финишные фильтры опционально
Нужен шкаф для депирогенизации посуды или система очистки воды для лаборатории? Опишите задачу, и специалист Глювекса подберёт модель.
