Выявление фальсификатов лекарственных средств методом высокоэффективной тонкослойной хроматографии

08.04.2025

По оценкам Всемирной организации здравоохранения значительная часть лекарственных средств, продающихся через Интернет, фальсифицированы. Применение поддельных препаратов может иметь самые серьезные последствия. Лекарства, содержащие некачественные или фальшивые ингредиенты, не содержащие заявленных действующих веществ или содержащие их в неправильной дозировке (слишком высокой или слишком низкой) представляют угрозу для здоровья и безопасности пациентов.
О возможностях оборудования CAMAG при выявлении фальсификатов лекарственных препаратов читайте в статье.

ВЭТСХ для Лаборатории по борьбе с контрафактной продукцией

В 2008 году международная французская фармацевтическая компания Sanofi создала Лабораторию по борьбе с контрафактной продукцией. Деятельность лаборатории направлена на выявление фальсификатов лекарственных препаратов посредством различных аналитических методов, в том числе при помощи ВЭТСХ. Исследования позволяют подтвердить наличие активных фармацевтических субстанций (АФС) или вспомогательных веществ (консервантов, ароматизаторов) в каждой лекарственной форме, выявить деградацию продуктов, хранящихся в неподходящих условиях, определить характеристики фальсифицированных препаратов. Для своих целей лаборатория преимущественно использует метод высокоэффективной тонкослойной хроматографии. ВЭТСХ прекрасно подходит для быстрого параллельного скрининга большого количества образцов, менее чем за час позволяя проанализировать до 10 образцов. Описанный далее метод прост, надежен и обеспечивает минимальный расход растворителей и реактивов.

Описание метода

Стандартные растворы

По отдельности растворяют 20 мг АФС № 1, 55 мг АФС № 2, 53 мг АФС № 3 и 51 мг примеси АФС № 2 в 10 мл воды (каждый).

Подготовка образца

Одну таблетку каждого образца предполагаемого фальсификата измельчают, после чего экстрагируют с помощью 7,5 мл воды посредством встряхивания. После центрифугирования переносят отфильтрованный супернатант в мерную колбу вместимостью 5 мл и доводят объем до метки.

Используют пластины для ВЭТСХ с силикагелем 60 F254 Merck, 20×10 см, предварительно промытые метанолом. Образцы и стандартные растворы наносят методом распыления с помощью автоматического аппликатора ATS 4 CAMAG: 14 дорожек, длина полосы 8,0 мм, расстояние от левого края 20,0 мм, расстояние от нижнего края 8,0 мм. Наносят 1,0 мкл растворов образца и 3,0 мкл стандартных растворов.

Автоматический аппликатор ATS 4 CAMAG

В автоматической камере ADC 2 CAMAG при насыщении камеры (20 мин) и после кондиционирования при относительной влажности 33 % в течение 10 мин с использованием насыщенного раствора магния хлорида проявление смесью дихлорметана, этанола, воды и муравьиной кислоты в пропорции 9:9:1,5:0,25 (объемная доля) на дистанции 50 мм (от нижнего края) с последующей сушкой в течение 5 мин.

Автоматическая камера ADC 2 CAMAG 

Постхроматографическая дериватизация

Опрыскивание вручную реактивом Драгендорфа, сушка в течение 60 с при комнатной температуре. Далее пластины вручную опрыскивают раствором натрия нитрита (5 %) и высушивают в течение 30 с при комнатной температуре.

Документирование

Изображения пластин снимают при помощи системы документирования TLC Visualizer CAMAG в режиме УФ-254 перед дериватизацией и в белом свете — после каждого этапа дериватизации.

Система документирования TLC Visualizer CAMAG

Измерение оптической плотности выполняют с помощью ТСХ-сканера CAMAG и системы visionCATS в следующих условиях: длина волны 272 нм, размер щели 5,0×0,2 мм, скорость измерения 20 мм/с, запись спектра в диапазоне 200–450 нм.

ТСХ-сканер CAMAG

Результаты

Представлен пример с образцами из практики. В процессе разработки метода для модельных образцов и образцов с добавками были получены те же значения R_F, что и для стандартных образцов. Было достигнуто хорошее разделение от компонентов матрицы. Любая положительная идентификация АФС № 2 и № 3 может быть подтверждена сравнением спектров испытуемых и стандартных образцов, равно как и ожидаемое присутствие примесей АФС № 2. Выявление АФС № 1 (случаи № 1–7) достигается после дериватизации в белом свете.

Представлены результаты для выбранных лекарственных препаратов, а также определение подлинности трех активных фармацевтических субстанций, ожидаемых в различных лекарственных формах для приема внутрь. ВЭТСХ также используется для оценки количества каждого из соединений. АФС № 3 отсутствует в составе оригинальных таблеток (случаи № 8–9). Однако в некоторых предыдущих случаях были выявлены контрафактные таблетки, содержащие АФС № 3 вместо АФС № 2.

Хроматограмма  (вверху) в УФ- 254нм до и (внизу) в белом свете после дериватизации; дорожки 1 и 10: АФС № 1; дорожки 2–8:
случаи № 1–7; дорожка 9: АФС № 3; дорожка 11: АФС № 2; дорожка 12: примесь АФС № 2; дорожки 13–14: случаи № 8–9

(слева) УФ-спектр АФС № 3 (красный) и образцов (случаи № 1-7); (справа) УФ-спектр АФС № 2 (красный) и образцов (случаи № 8–9)

В представленных случаях фальсификации выявлено не было. Приведенный метод демонстрирует способ быстрого и эффективного обнаружения фальсификатов лекарственных средств с использованием оборудования для тонкослойной хроматографии CAMAG.